কিভাবে স্পেকট্রোফোটোমেট্রিক বিশ্লেষণ করবেন: 13 টি ধাপ

2024 লেখক: Jason Gerald | [email protected]. সর্বশেষ পরিবর্তিত: 2023-12-16 10:57

স্পেকট্রোফোটোমেট্রি হল একটি পরীক্ষামূলক কৌশল যা নির্দিষ্ট দ্রবণে দ্রবণটির ঘনত্ব পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয় সেই পদার্থ দ্বারা শোষিত আলোর পরিমাণ গণনা করে। এই কৌশলটি খুবই উপকারী কারণ নির্দিষ্ট যৌগগুলি বিভিন্ন তীব্রতায় আলোর বিভিন্ন তরঙ্গদৈর্ঘ্য শোষণ করবে। একটি সমাধানের মধ্য দিয়ে যাওয়া আলো বিশ্লেষণ করে, আপনি দ্রবণে দ্রবীভূত যৌগ এবং তাদের ঘনত্ব সনাক্ত করতে পারেন। ল্যাবরেটরিতে এই কৌশল দিয়ে সমাধান বিশ্লেষণ করতে ব্যবহৃত টুল হল একটি স্পেকট্রোফোটোমিটার।

ধাপ

3 এর অংশ 1: নমুনা প্রস্তুত করা

ধাপ 1. স্পেকট্রোফোটোমিটার চালু করুন।

বেশিরভাগ স্পেকট্রোফোটোমিটার সঠিক পরিমাপ দেওয়ার আগে উষ্ণ করা প্রয়োজন। সুতরাং, মেশিনটি শুরু করুন এবং তারপরে নমুনা পরিমাপ করার আগে কমপক্ষে 15 মিনিটের জন্য বসতে দিন।

নমুনা প্রস্তুত করতে এই সময়টি ব্যবহার করুন।

ধাপ 2. কিউভেট বা টেস্টটিউব পরিষ্কার করুন।

স্কুল ল্যাবরেটরিতে, ডিসপোজেবল টেস্ট টিউব পাওয়া যেতে পারে যা প্রথমে পরিষ্কার করতে হবে না। যাইহোক, যদি আপনি নিয়মিত কিউভেট বা টেস্ট টিউব ব্যবহার করেন তবে ব্যবহারের আগে যন্ত্রটি ভালভাবে পরিষ্কার করুন। ডিওনাইজড জল দিয়ে সমস্ত কিউভেট ধুয়ে ফেলুন।

• Cuvettes ব্যবহারে সতর্ক থাকুন কারণ এগুলি বেশ ব্যয়বহুল।
• কিউভেট ব্যবহার করার সময়, আলো যে পাশ দিয়ে যায় সেদিকে স্পর্শ করবেন না (সাধারণত পাত্রে পরিষ্কার দিক)।

ধাপ 3. কিউভেটে পর্যাপ্ত নমুনা ালুন।

কিউভেটের অংশের সর্বোচ্চ ভলিউম 1 মিলি, যখন টেস্ট টিউবের সর্বোচ্চ ভলিউম 5 মিলি। আপনার পরিমাপ সঠিক হওয়া উচিত যতক্ষণ না স্পেকট্রোফোটোমিটারের আলো এখনও নমুনার মধ্য দিয়ে যেতে পারে এবং পাত্রে খালি অংশ নয়।

আপনি যদি নমুনা সন্নিবেশ করার জন্য একটি পিপেট ব্যবহার করেন, প্রতিটি নমুনার জন্য একটি নতুন টিপ ব্যবহার করুন। এইভাবে, ক্রস-দূষণ এড়ানো যেতে পারে।

ধাপ 4. নিয়ন্ত্রণ সমাধান প্রস্তুত করুন।

এই সমাধানগুলি যা খালি বা ফাঁকা নামেও পরিচিত, বিশ্লেষণ করা দ্রবনে কেবল দ্রাবক থাকে। উদাহরণস্বরূপ, যদি আপনার পানিতে দ্রবীভূত লবণের নমুনা থাকে তবে আপনার যে ফাঁকা সমাধান প্রয়োজন তা হল জল। আপনি যে জল ব্যবহার করছেন তা যদি লাল হয় তবে আপনার একটি লাল ফাঁকা দ্রবণও ব্যবহার করা উচিত। নমুনা হিসাবে একই ভলিউমে ফাঁকা সমাধান ধরে রাখার জন্য একটি অনুরূপ ধারক ব্যবহার করুন।

ধাপ 5. কিউভেটের বাইরে মুছুন।

স্পেকট্রোফোটোমিটারে কিউভেট Beforeোকানোর আগে, আপনাকে অবশ্যই নিশ্চিত করতে হবে যে এটি ধুলো কণা বা অমেধ্যের কারণে পরিমাপে হস্তক্ষেপ এড়াতে পরিষ্কার। কিউভেটের বাইরে লেগে থাকা পানির ফোঁটা বা ধুলো অপসারণ করতে একটি লিন্ট-ফ্রি কাপড় ব্যবহার করুন।

3 এর অংশ 2: পরীক্ষা করা

ধাপ 1. নমুনা বিশ্লেষণ করতে আলোর তরঙ্গদৈর্ঘ্য নির্ধারণ এবং সমন্বয় করুন।

পরিমাপের কার্যকারিতা বাড়াতে একক তরঙ্গদৈর্ঘ্যের আলোর (একরঙা রশ্মি) ব্যবহার করুন। আলোর রঙ চয়ন করুন যা পরীক্ষার নমুনায় দ্রবীভূত হওয়া রাসায়নিক উপাদান দ্বারা শোষিত হতে পারে। আপনি যে স্পেকট্রোফোটোমিটার ব্যবহার করছেন তার স্পেসিফিকেশন অনুযায়ী তরঙ্গদৈর্ঘ্য সেট করুন।

• স্কুল পরীক্ষাগারে, এই তরঙ্গদৈর্ঘ্যগুলি সাধারণত পরীক্ষামূলক নির্দেশাবলীতে দেওয়া হবে।
• যেহেতু নমুনা সমস্ত দৃশ্যমান আলোকে প্রতিফলিত করবে, পরীক্ষামূলক আলোর রঙের তরঙ্গদৈর্ঘ্য সাধারণত নমুনার রঙের থেকে সর্বদা আলাদা থাকে।
• একটি বস্তু একটি নির্দিষ্ট রঙ দেখায় কারণ এটি একটি নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যকে প্রতিফলিত করে এবং অন্য সব রং শোষণ করে। ঘাস সবুজ বলে মনে হয় কারণ এতে থাকা ক্লোরোফিল সবুজকে প্রতিফলিত করে এবং অন্যান্য রং শোষণ করে।

ধাপ 2. একটি ফাঁকা সমাধান দিয়ে বর্ণালী ফোটোমিটার ক্যালিব্রেট করুন।

কিউভেট হোল্ডারের মধ্যে ফাঁকা সমাধান রাখুন এবং স্পেকট্রোফোটোমিটার বন্ধ করুন। এনালগ স্পেকট্রোফোটোমিটার স্ক্রিনে, একটি সূঁচ রয়েছে যা আলো সনাক্তকরণের তীব্রতার উপর ভিত্তি করে সরে যাবে। ফাঁকা সমাধান Afterোকানোর পরে, সুইটি ডানদিকে সরানো উচিত। আপনার পরে প্রয়োজন হলে এই মানটি রেকর্ড করুন। ফাঁকা দ্রবণটিকে স্পেকট্রোফোটোমিটারে থাকতে দিন, তারপর অ্যাডজাস্টিং নোব ব্যবহার করে সুচকে শূন্যে স্লাইড করুন।

• ডিজিটাল স্পেকট্রোফোটোমিটারগুলিও একইভাবে ক্যালিব্রেট করা যায়। যাইহোক, এই সরঞ্জামটি একটি ডিজিটাল স্ক্রিন দিয়ে সজ্জিত। কন্ট্রোল নোব দিয়ে ফাঁকা সমাধানটি 0 এ সেট করুন।
• এমনকি যদি স্পেকট্রোফোটোমিটার থেকে ফাঁকা সমাধান সরানো হয়, তবুও ক্রমাঙ্কন বৈধ থাকবে। সুতরাং, যখন আপনি পুরো নমুনাটি পরিমাপ করবেন, ফাঁকাটির শোষণ স্বয়ংক্রিয়ভাবে হ্রাস পাবে।

ধাপ the। ফাঁকাটি সরান এবং স্পেকট্রোফোটোমিটার ক্রমাঙ্কন ফলাফল পরীক্ষা করুন।

স্পেকট্রোফোটোমিটার থেকে ফাঁকা সমাধান সরানোর পরেও, স্ক্রিনে সুই বা সংখ্যাটি এখনও 0 পড়তে হবে। যদি একটি ফাঁকা সমাধান ব্যবহার করে স্পেকট্রোফোটোমিটার সঠিকভাবে ক্যালিব্রেট করা হয়, তবে স্ক্রিনে ফলাফলটি এখনও 0 হওয়া উচিত।

• যদি স্ক্রিনে সূঁচ বা সংখ্যাটি 0 না পড়ে তবে একটি ফাঁকা সমাধান দিয়ে ক্রমাঙ্কন পদক্ষেপগুলি পুনরাবৃত্তি করুন।
• যদি সমস্যাটি থেকে যায়, সাহায্য নিন অথবা কাউকে স্পেকট্রোফোটোমিটার পরীক্ষা করুন।

ধাপ 4. নমুনার শোষণ পরিমাপ করুন।

ফাঁকা সমাধানটি সরান এবং স্পেকট্রোফোটোমিটারে নমুনাটি োকান। হাত স্থির হওয়ার জন্য প্রায় 10 সেকেন্ড অপেক্ষা করুন বা ডিজিটাল ডিসপ্লেতে সংখ্যা পরিবর্তন হওয়া বন্ধ করুন। শতকরা ট্রান্সমিশন এবং/অথবা নমুনার শোষণ রেকর্ড করুন।

• যত বেশি আলো যায়, তত কম আলো শোষিত হয়। সাধারণত, আপনাকে নমুনার শোষণ মান রেকর্ড করতে হবে যা সাধারণত দশমিক সংখ্যা হিসাবে প্রকাশ করা হয়, উদাহরণস্বরূপ 0.43।
• প্রতিটি নমুনার পরিমাপ কমপক্ষে তিনবার পুনরাবৃত্তি করুন এবং তারপরে গড় গণনা করুন। এইভাবে, আপনি যে ফলাফলগুলি পাবেন তা আরও নির্ভুল হবে।

ধাপ 5. আলোর বিভিন্ন তরঙ্গদৈর্ঘ্যের সাথে পরীক্ষাটি পুনরাবৃত্তি করুন।

আলোর তরঙ্গদৈর্ঘ্যের উপর নির্ভর করে আপনার নমুনায় বিভিন্ন যৌগ থাকতে পারে যার বিভিন্ন শোষণ ক্ষমতা রয়েছে। অনিশ্চয়তা কমাতে, হালকা বর্ণালী জুড়ে 25 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যের বিরতিতে নমুনা পরিমাপ পুনরাবৃত্তি করুন। এইভাবে, আপনি নমুনায় অন্যান্য দ্রবীভূত রাসায়নিকগুলি সনাক্ত করতে পারেন।

3 এর অংশ 3: শোষণ ডেটা বিশ্লেষণ

ধাপ 1. নমুনার প্রেরণ এবং শোষণের হিসাব করুন।

ট্রান্সমিট্যান্স হল কতটা আলো নমুনার মধ্য দিয়ে অতিক্রম করে বর্ণালী -ফোটোমিটারে পৌঁছতে পারে। এদিকে, শোষণ হল নমুনায় দ্রবীভূত রাসায়নিকগুলির মধ্যে কতটা আলো শোষণ করে। অনেক আধুনিক স্পেকট্রোফোটোমিটার রয়েছে যা ট্রান্সমিট্যান্স এবং শোষণের আকারে আউটপুট দেয়। যাইহোক, যদি আপনি একটি হালকা তীব্রতা মান পান, আপনি নিজেও এই দুটি মান গণনা করতে পারেন।

• ফাঁকা দ্রবণের মধ্য দিয়ে যাওয়া আলোর পরিমাণের মাধ্যমে নমুনা দ্রবণের মধ্য দিয়ে যাওয়া আলোর তীব্রতা ভাগ করে ট্রান্সমিট্যান্স (টি) নির্ণয় করা যায়। এই মানটি সাধারণত দশমিক সংখ্যা বা শতাংশ হিসাবে প্রকাশ করা হয়। টি = আমি/আমি₀, যেখানে আমি নমুনার তীব্রতা এবং আমি₀ ফাঁকা তীব্রতা।
• Absorbance (A) একটি নেতিবাচক ভিত্তি হিসাবে প্রকাশ করা হয় 10 লগারিদম (এক্সপোনেন্ট) ট্রান্সমিট্যান্স: A = -log₁₀T. সুতরাং, যদি T = 0, 1, A = 1 (0, 1 হল -1 এর ক্ষমতার 10)। এর মানে হল যে 10% আলো পাস হয়, যখন 90% শোষিত হয়। এদিকে, যদি T = 0.01, A = 2 (0.01 -2 এর ক্ষমতার 10 হয়)। এর অর্থ হল, যে আলোটি পাস হয়েছে তা 0.1%।

ধাপ 2. শোষণ মান বনাম তরঙ্গদৈর্ঘ্য গ্রাফ করুন।

Y- অক্ষ হিসাবে শোষণ মান এবং x- অক্ষ হিসাবে তরঙ্গদৈর্ঘ্য প্রকাশ করুন। প্রতিটি তরঙ্গদৈর্ঘ্যের সমস্ত শোষণের ফলাফলের বিন্দু থেকে, আপনি নমুনার শোষণ বর্ণালী পাবেন এবং নমুনায় যৌগের বিষয়বস্তু এবং এর অনুপাত চিহ্নিত করবেন।

শোষণ বর্ণালী সাধারণত নির্দিষ্ট তরঙ্গদৈর্ঘ্যে শিখর থাকে। এই শিখর তরঙ্গদৈর্ঘ্য আপনাকে নির্দিষ্ট যৌগ চিহ্নিত করতে দেয়।

পদক্ষেপ 3. একটি পরিচিত যৌগের গ্রাফের সাথে আপনার শোষণ বর্ণালী তুলনা করুন।

প্রতিটি যৌগের একটি অনন্য শোষণ বর্ণালী থাকে এবং প্রতিটি পরিমাপে সর্বদা একই শিখর তরঙ্গদৈর্ঘ্য থাকে। একটি নির্দিষ্ট পরিচিত যৌগের গ্রাফের সাথে আপনি যে গ্রাফটি পান তা তুলনা করে, আপনি নমুনা সমাধানের দ্রবণীয় বিষয়বস্তু সনাক্ত করতে পারেন।